A498 Instruções do meio específico para células de câncer renal humano

Descrição do produto:

O meio de cultivo específico de células A-498 foi cuidadosamente otimizado pela equipe técnica e, após testes a longo prazo, este produto pode manter o crescimento ideal de células A-498. Este produto já contém vários ingredientes necessários para o crescimento de células A-498 e pode ser usado diretamente para a cultura in vitro de células A-498 sem a adição de ingredientes. Este produto é somente para uso científico adicional e não deve ser usado para diagnóstico, tratamento, uso clínico, doméstico ou outros fins.

Etapas específicas da cultura celular:

I. Equipamento comum

1. Equipamento da sala de preparação

Destilador de água de destilação única, destilador de água de destilação dupla, cilindro de ácido, forno, panela de alta pressão, armário de armazenamento (para colocar itens não desinfetados), armário de armazenamento (para colocar itens desinfetados), mesa de embalagem. Equipamento da sala de distribuição: balança de torção e balança eletrônica (pesagem de medicamentos),O PHMedidor (medição do líquido de cultura)O PHvalor), agitador magnético (configurar a solução de agitação da câmara de solução).

2. Equipamento da sala de cultivo

Tanques de nitrogênio líquido, armazéns (para armazenar resíduos), lâmpadas solares e ultravioletas, sistema de purificador de ar, frigorífico a baixa temperatura (-80℃Ar condicionado, garrafa de dióxido de carbono, mesa lateral (registro de experimento escrita).

3. Equipamento que deve ser colocado em uma sala estéril

Centrífuga (coleta de células), mesa de trabalho ultra-limpa, microscópio invertido,CO2incubadora (cultura de incubação), panela de banho de água, desinfetadora de trióxido,4℃Frigorífico (colocado)soroe líquidos de cultivo).

II. Operação estéril

1) Esterilização de câmaras estériles

1.Limpe regularmente a sala estéril: limpe uma vez por semana, primeiro arraste o chão com água da torneira, limpe a mesa, mesa de trabalho super limpa, etc., e depois use3‰Venha a Sur ou a Nova Zelândia.0.5% de ácido acético limpo.

2.CO2Esterilização da incubadora: Primeiro uso3‰Xingel limpar e, em seguida, usar75% limpar com álcool ou0.5% de ácido peróxido acético, depois iluminado com luz ultravioleta.

3.Esterilização pré-experimental: liga a luz ultravioleta, a máquina de trióxido e o sistema de purificador de ar20-30Um minuto.

4.Esterilização após o experimento:75% de álcool (3‰limpar a mesa ultra-net, a mesa lateral, a mesa de carregamento do microscópio invertido.

Métodos de cultura celular:

01 Etapas de operação de cultivo original

As etapas operacionais da cultura original são: extração de materiais→Separação→Educação.

（1Extração: Existem diferentes métodos de extração para diferentes tecidos, mas todos devem manter o material fresco e estritamente estéril.

As etapas de operação de cultura de transmissão celular são as seguintes:

（1Observar a morfologia celular e a densidade de crescimento sob microscópio invertido antes da transmissão, quando a densidade de crescimento celular é atingida80%~90%Quando possível, a transmissão.

（2Sucionar ou derramar o líquido da garrafa de cultura. InscreverPBSLimpeza1~2Depois, sacude suavemente à esquerda e à direita.

（3Adicionar a quantidade adequada na garrafa de acordo com o tamanho da garrafaEDTAGeralmente, deve cobrir todo o fundo da garrafa.

（4Coloque a garrafa de cultivo37 ℃ CO2caixa de cultivo para a digestão,2 ~ 5 minutosDepois de tirar e colocar sob um microscópio invertido para observação, quando descoberto que há70%~80%Quando a contração celular se arredonda e o espaço celular aumenta, bate suavemente na garrafa de cultura para que as células restantes caiam e adicione imediatamente2Multiplicar a quantidade de líquido de cultura para interromper a digestão, usar a cabeça de aspiração para soprar suavemente e misturar uniformemente para evitar a digestão excessiva.

（5Sucionar toda a suspensão celular para dentro do tubo centrífugo,1000rpm / minCentrífuga3 ~ 5 minutos- É.

（6Eliminar, adicionar a quantidade apropriada de líquido de cultura para ressuspender as células e misturar suavemente para que as células se dispersem uniformemente.

（7(1) Usar a cabeça de aspiração para aspirar a quantidade apropriada de suspensão celular, vacinar em uma nova garrafa de cultura com a densidade apropriada, complementar o líquido de cultura, agitar bem e colocar em37 ℃ CO2cultivo na caixa de cultivo.

（8Determinar o tempo de troca de fluido ou transmissão, dependendo do estado de crescimento celular, e até mesmo realizar o congelamento celular.

Atenção:

（1Operação estritamente estéril, todos os reagentes e consumíveis ​​usados ​​devem ser estériles e devem ser expostos ao UV na mesa de trabalho ultra-limpa estéril30 minutosacima, para evitar a contaminação das células.

（2O líquido de cultura utilizado deve ser adequado para a sobrevivência e o crescimento celular. Células provenientes de diferentes espécies de animais e tipos de tecidos, os requisitos para o líquido de cultura são diferentes, e, se necessário, o método pré-experimental pode ser usado para escolher o líquido de cultura adequado.

（3O soro fetal bovino desempenha um papel fundamental na manutenção da sobrevivência celular e na promoção do crescimento celular. O soro fetal bovino adequado pode ser selecionado com base na literatura ou no pré-experimento. Uma vez determinado, deve ser mantido até a conclusão do experimento.

（4A digestão das células deve ser evitada quando o tempo de digestão é curto demais para levar à digestão, o número de células coletadas é pequeno, ou o tempo de digestão é longo demais para levar à libertação de células em aglomerados, quando as células já estão danificadas ou mortas, afetando o número de células e o progresso do experimento.

（5A centrifugação celular deve evitar o número insuficiente de células coletadas por força excesivamente pequena ou a força excesivamente grande para causar danos às células. Depois da centrifugação, a precipitação celular deve ser descartada após a limpeza, a precipitação celular deve ser espalhada e o líquido de cultura adicionado deve ser ressuspendido, de modo que o dano celular seja menor do que o sofrimento direto e possa melhorar a taxa de vida celular.

（6Ao soprar as células, deve-se tentar evitar a produção de células para evitar danos às células e afetar o estado das células (a parte residual do líquido durante o sopramento na cabeça de aspiração pode reduzir a produção de bolhas).

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