SCC7 (células cancerosas de células escamosas de rato)

Propriedades básicas das células

Fonte do tecido: câncer de células escamosas

Características de crescimento: Crescimento de parede

Morfologia celular: epitelial

A célula de câncer de células escamosas de camundongo SCC7 refere-se a células que obtêm células individuais de tecidos ou órgãos do organismo, colágenase, e outros métodos e fazem culturas ambientais simuladas do organismo in vitro.

Nível de Biosegurança: 1

Especificações celulares: 1 x 106cells/T25 garrafa de cultura ou embalagem de tubo de congelamento de 1ml

Mídio: 1640+10% FBS

Condições de cultivo: fase gás: ar, 95%; CO2, 5%. Temperatura: 37 graus Celsius, umidade da bacia de cultivo de 70% -80%.

Condições de congelamento: líquido congelado: 90% FBS, DMSO 10%,

Tempo de multiplicação: 2 a 3 vezes por semana

Proporção de transmissão: 1:2

Frequência de troca: 2-3 dias

II. Operação de cultura celular

1) Recuperação de células: o tratamento de congelamento de cultura celular abaixo é apenas para referência, as etapas operacionais específicas são baseadas nas instruções do produto fornecido

O tubo de congelamento contendo 1 ml de suspensão celular é agitado rapidamente para descongelar em banho de água a 37 ° C, adicionando 4 ml de meio de cultura para misturar uniformemente. Centrifuge a 1.000 rpm por 3 min, descarte o líquido de supernatação e acrescente 1-2 ml de meio de cultura depois de soprar bem. Em seguida, todas as suspensões celulares são adicionadas a uma garrafa com uma quantidade moderada de meio para a cultura durante a noite (ou a suspensão celular é adicionada a um prato de 6 cm com cerca de 4 ml de meio para a cultura durante a noite). No terceiro dia, troce o líquido e verifique a densidade celular.

2) Transferência celular: se a densidade celular chegar a 80% -90%, a cultura de transmissão pode ser realizada.

a、 Quando as células crescem até cobrir 80% da área da garrafa, descarte o líquido de cultura na garrafa de 25 cm2 e limpe as células uma vez com PBS;

b、 Adicionar 0,25% de líquido digestivo cerca de 1 ml para a garrafa de cultura, observar sob o microscópio invertido, até que as células retornem ao círculo para adicionar o líquido de cultura para terminar a digestão, em seguida, suavemente soprar as células para que caiam, em seguida, transferir a suspensão para o tubo de centrífuga de 15 ml, 1000rpm centrífuga 5min;

c、 Eliminar o soro superior, as células precipitadas são ressuspendidas em meio de cultura de 12 ml, em seguida, em proporção de 1: 2 para a transmissão em garrafas, e finalmente colocado em 37 ° C, 5% de cultura de células de CO2;

d、 Depois de colocar as células na parede, observe os resultados da cultura e, em seguida, a cultura de troca líquida ou transmissão.

3) Congelação celular: quando as células estão em bom estado de crescimento, as células podem ser congeladas. A garrafa T25 abaixo é um exemplo;

a、 Quando as células crescem até cobrir 80% da área da garrafa, descarte o líquido de cultura na garrafa de 25 cm2 e limpe as células uma vez com PBS;

b、 Adicionar 0,25% de líquido digestivo cerca de 1 ml para a garrafa de cultura, observar sob o microscópio invertido, até que as células retornem ao círculo para adicionar o líquido de cultura para terminar a digestão, suavemente soprar as células para que caiam, em seguida, transferir a suspensão para o tubo de centrífuga de 15 ml, 1000rpm centrífuga 5min;

c、 Suspender as células com a quantidade adequada de líquido congelado (FBS: DMSO = 9: 1) e colocar em um tubo de congelamento;

d、 Primeiro, coloque o tubo de congelamento celular em -20 ° C para 1,5 h, em seguida, movê-lo para -80 ° C durante a noite e transferi-o para o nitrogênio líquido para conservação a longo prazo após 24 h. A caixa de refrigeração do programa pode ser colocada diretamente em -80 ° C.

III. Desenvolver atenção

Depois de receber as células, primeiro observe se a garrafa de células está intacta, se o líquido de cultura tem vazamento, turbidez e outros fenômenos, se o fenômeno acima ocorrer, entre em contato conosco prontamente.

Leia cuidadosamente as instruções de células para entender as informações relacionadas com as células, como a morfologia celular, o meio de cultura usado, a proporção sérica, as citocinas necessárias, etc., para garantir que as condições de cultura celular sejam consistentes, se as condições de cultura não forem consistentes e causarem problemas com as células, a responsabilidade é assumida pelo próprio cliente.

Limpe a superfície da garrafa com 75% de álcool e observe o estado da célula sob o microscópio. Devido a problemas de transporte, algumas células formam fragmentos devido às mudanças de temperatura e ao forte toque. Depois de observar o bom estado das células, a parede da garrafa de desinfecção de 75% de álcool colocar a garrafa T25 em uma caixa de cultivo de 37 ° C para 2-4 h.

As células de parede podem ser digeridas, as células em suspensão são misturadas diretamente para recolher as células, 900 rpm-1000 rpm por centrifugação em 3 min e descartar. Adicione 5 mL de PBS para ressuspender as células, centrifuge em seguida 900 rpm-1000 rpm por 3 min, ressuspenda as células com um meio fresco e injete-as em uma nova garrafa ou prato de petri e coloque-as em uma caixa para a cultura.

5. Solicite ao cliente usar o mesmo meio de cultura em condições para a cultura celular.

Recomenda-se que os clientes tirem algumas fotos das células nos primeiros 3 dias após o recebimento das células, para registrar o estado das células e facilitar a comunicação com o nosso departamento técnico. As células sensíveis individuais podem ser instáveis ​​devido ao transporte, por favor, entre em contato conosco prontamente para informar sobre a situação específica das células para que nossos técnicos possam acompanhar a visita até que o problema seja resolvido.

A célula é somente para uso científico.

Nota: o meio de cultura para transporte (meio de irrigação) não pode mais ser usado para cultivar células, por favor, substitua o meio de cultura recém-formulado de acordo com as condições de cultura celular do manual para cultivar células. A primeira transmissão após a recepção das células sugere a transmissão 1:2.

Observação: a transmissão 1:2 é 1 garrafa T25 para 2 garrafas T25 ou 2 pratos de 6 cm. Não 1 garrafa T25 passa por 2 pratos de 10 cm.

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