TRzol (Reagente de extração de RNA total)

TRzol (Reagente de extração de RNA total)

Introdução do produto:

O TRzol é um reagente que extrai o RNA total diretamente de uma célula ou tecido. Mantém a integridade do RNA ao quebrar e dissolver as células. Após a adição de cloroformo, a amostra é dividida em camadas hidrográficas e orgânicas. O RNA está presente na camada de água. Após a coleta da amostra acima, o RNA pode ser recuperado através da precipitação de isopropanol.

Seja humano, animal, planta ou tecido bacteriano, este método tem um melhor efeito de separação para pequenas e grandes quantidades de tecidos e células. A simplicidade de operação do reagente TRzol permite o processamento simultâneo de várias amostras. Todas as operações podem ser realizadas em uma hora. O RNA total extraído pelo TRzol evita a contaminação do DNA e das proteínas. Portanto, é possível fazer análise de impressão de RNA, cruzamento de manchas, seleção de poli(A)+, transcrição in vitro, análise de proteção enzimática de RNA e clonagem molecular.

O reagente TRzol facilita a separação de vários tipos de RNA de diferentes tamanhos moleculares. Por exemplo, o RNA extraído do fígado de ratos através de eletroferese em gel de gonadotase e tingido com lintegas de bromuro de beta, mostrou muitas faixas discontínuas de alto peso molecular entre 7 kb e 15 kb (componentes de mRNA e hnRNA), dois ribosomas vantajosos ~5kb (28S) e ~2kb (18S), e RNA de baixo peso molecular entre 0,1 e 0,3kb (tRNA, 5S). Quando o RNA extraído é diluído com TE, sua relação A 260 / A 280 é ≥ 1,8.

Armazenamento do produto: o TRzol pode ser mantido de forma estável a temperatura ambiente por 12 meses. No entanto, para obter melhores resultados, recomendamos conservar em um ambiente de 2-8 ° C. (Veja instruções específicas)

DNA modelo: a reação de PCR requer DNA modelo, como extração de DNA de células, tecidos, sangue, etc.

Primário: os dois primeiros da reação de PCR, respectivamente, com as duas extremidades do DNA do modelo emparelhado para ampliar a área específica necessária, o primeiro também pode ser sintetizado para ser usado no processo de clonagem de TA e outros primeiros;

dNTPs: quatro tipos de dNTPs são necessários na reação de PCR, incluindo desoxiadenótido (dATP), desoxitimotído (dCTP), desoxiaviotido (dGTP), ácido desoxicitocínico (dTTP), para processos biológicos como divisão celular, síntese de DNA e outros, para a extensão e amplificação da cadeia de DNA modelo para amplificação de PCR;

Polimerase de DNA Taq: a polimerase necessária para a reação de PCR, geralmente a polimerase Taq é usada, e há alguns outros tipos de polimerase, como PFU, Phusion, etc., para ampliar a cadeia de DNA;

Solução tampão de PCR: tem um efeito tampão para a reação de PCR, regula o pH da reação, sal de sulfato de hidrogênio SDS, compostos orgânicos de pequenas moléculas como formaldeído, pode melhorar a especificidade da reação de PCR, melhorando assim a eficiência da reação;

Sistema de corte enzimático: a amplificação de PCR muitas vezes envolve etapas experimentais como recombinação, construção e sequência, muitas vezes exigindo operações de corte enzimático.

MARK: um padrão de peso molecular usado para determinar o tamanho de fragmentos de DNA.

Kit de purificação de DNA: usado para purificar os produtos da reação de PCR;

Milho de Nak; oligo DT
Ao escolher o Oligo dT, o RNA deve ter Poly A, então o mRNA de eunucleos é aplicável. As RT adequadas para mRNA de cadeia longa ou até mesmo de comprimento completo exigem alta qualidade de amostras de RNA sem poluição do DNA, degradação do RNA e ruptura do RNA. Se você quiser explorar um novo mRNA para uma resposta RT, recomenda-se o uso de precursores Oligo dT. O uso de primeiros Oligo dT oferece maior estabilidade do que primeiros aleatórios e específicos.
② Introdução aleatória
A RT é adequada para uma variedade de RNA, especialmente em situações em que a abundância de modelos é baixa (por exemplo, a expressão de um gene é baixa). Ao selecionar um precursor aleatório, a síntese de cDNA em cadeia é baseada em todo o RNA como modelo e, em seguida, o precursor é projetado para amplificação específica durante a reação de PCR. Ao mesmo tempo, prestar atenção à relação entre a quantidade de precursores aleatórios e a quantidade total de RNA, geralmente é recomendado que a quantidade de precursores aleatórios por 5 µg de RNA total seja de 50 ng, se a quantidade de precursores aleatórios por 5 µg de RNA total for superior a 250 ng, pode levar ao aumento do produto de pequenos fragmentos (< 500 bp) e a redução do produto de segmentos longos e comprimento completo.
② Atrações Específicas
Um protótipo específico do gene (GSP) é um protótipo que faz parte de uma determinada sequência genética e é complementar ao modelo. O precursor precisa ser projetado em combinação com a sequência conhecida do RNA alvo. Devido à ligação específica do precursor à sequência de RNA, cada RNA alvo necessita de um novo conjunto de precursores genéticamente específicos. Portanto, ao analisar vários alvos, é necessário aplicar mais amostras de RNA. Além disso, a temperatura de cozimento de diferentes primeiros não é a mesma, por isso geralmente não é recomendado. Se forem necessários primeiros específicos, é recomendado otimizar a temperatura de cozimento.