【JD-CW32H】【Equipamento de detecção de peste suína africana seleciona a tecnologia da corrida, todos os tipos de equipamento completo, pronto para uso! Pacote de ensino para ajudar a prevenir a peste suína! 】。

Qual é a tecnologia principal do detector rápido de peste suína africana? Por que identificar o vírus com precisão?

“Por que o detector pode detectar vírus em dezenas de minutos?” “Qual é a diferença de precisão entre os diferentes equipamentos?” O “olho de ouro de fogo” do detector rápido de peste suína africana, deriva de uma descoberta de três tipos de tecnologia básica. Essas tecnologias permitem um julgamento preciso de “se há vírus” a “quanto vírus”, bloqueando a “identificação única” do vírus, por trás da profunda fusão de biologia molecular e engenharia.

Técnica de Imunoanálise de Colóide de Ouro: “Sentinela de Base” com resultados em 15 minutos

O detector rápido de ouro colóide é um dispositivo para famílias dispersas, cuja essência tecnológica principal é a "combinação específica de antígenos virales e anticorpos", semelhante à "fechadura de chaves".

O cartão de detecção desses dispositivos contém duas linhas-chave: a linha de detecção (linha T) fixa anticorpos específicos para a proteína P72 do vírus da peste suína africana e a linha de controle de massa (linha C) fixa anticorpos anti-ouro. No momento da detecção, o antígeno viral na amostra se liga ao anticorpo marcado com ouro colóide, formando um complexo de "anticorpo marcado com ouro - antígeno viral", quando o composto flui para a linha T, é capturado pelos anticorpos da linha T, o ouro colóide acumulado forma uma faixa vermelha, indicando que é positivo; Os anticorpos não ligados continuam a fluir para a linha C e são capturados, formando uma faixa vermelha para confirmar que o teste é eficaz.

A precisão dessa técnica vem da "exclusividade" dos anticorpos contra a proteína P72, que só se liga ao vírus da peste suína africana e não reage a outros vírus, como a peste suína e a doença da orelha azul, com especificidade superior a 95%. A experiência do mestre Li, criador de Shandong, confirmou isso: "Detectar suínos com febre com cartão de ouro colóide, resultados em 15 minutos, acompanhamento e revisão laboratória consistente, sem erros". No entanto, sua sensibilidade é limitada, só pode detectar concentrações médias e altas de vírus (≥1000 cópias / μL), o que é mais adequado para a triagem inicial de emergência.

Tecnologia de PCR quantitativa por fluorescência em tempo real: o "padrão ouro" para diagnósticos precisos

A tecnologia de PCR é fundamental para o diagnóstico em pequenas e médias fazendas de suínos, com a "amplificação específica de ácido nucleico viral e rastreamento fluorescente" que captura com precisão a presença de uma única cópia do vírus.

A lógica de detecção deste tipo de dispositivo tem três etapas: primeiro, destruir a casca do vírus através de um lito para extrair seu DNA único (alvo é o gene altamente conservador B646L, que é compartilhado por todos os vírus da peste suína africana); Em seguida, introdutores específicos são adicionados para bloquear o fragmento do gene B646L como uma “âncora de localização” e, sob a ação da DNA polimerase, o segmento alvo é multiplicado milhões de vezes através da reação circular “degeneração – cozimento – extensão”; Ao mesmo tempo, a sonda fluorescente libera o sinal fluorescente durante o processo de amplificação e o dispositivo calcula a quantidade inicial de vírus rastreando a intensidade do sinal em tempo real.

Os dados experimentais do TH-P800 mostram que detecta vírus de até 10 cópias por μL, o equivalente a encontrar um grânulo de sal em 1 tonelada de água. Zhao Lei, um veterinário de uma fazenda de suínos em Hebei, explicou: "Mesmo que os suínos estejam apenas infectados e tenham pouca quantidade de vírus no sangue, eles podem ser capturados por sinais fluorescentes após 30 ciclos de amplificação, o que é a chave para um diagnóstico precoce".

Tecnologia de combinação RPA-CRISPR/Cas12a: uma nova geração de "precisão rápida"

Como uma nova tecnologia em ascensão nos últimos anos, o dispositivo RPA-CRISPR combinado permite um equilíbrio “rápido e quasi”, com sensibilidade que ultrapassa a PCR convencional, com o núcleo de “dupla validação de amplificação isotérmica + ferramentas de edição de genes”.

O processo de detecção é realizado em duas etapas: a amplificação do gene B646L do vírus a níveis detetáveis em 15 minutos por meio da técnica de amplificação da polimerase recombinase (RPA), que resolve o problema demorado que a PCR tradicional requer refrigeração repetida; O crRNA pré-projetado funciona como um "assistente" para encontrar o gene viral amplificado, ativando a atividade de corte do Cas12a, permitindo que ele corte as moléculas relatoras de fluorescência próximas e libere sinais fluorescentes.

Os estudos do Shenzhen Institute mostraram que a tecnologia tem uma sensibilidade de até 20 cópias/mL e permite a detecção de duplo padrão de comparação de cor e fluorescência: amostras positivas mostram amarelo e emitem sinais fluorescentes ao mesmo tempo, e a dupla validação evita erros causados ​​por interferências ambientais. Em 12 amostras reais de sangue suíno, a precisão foi de 100% e não reagiu cruzadamente com outros vírus suínos. Liu Feng, diretor veterinário de um grupo de cultivos, comentou: "Anteriormente, a PCR levava duas horas, agora os resultados são obtidos em 40 minutos com o dispositivo RPA-CRISPR, com maior precisão, especialmente adequado para triagem em lote". ”

Senha comum identificada com precisão: bloqueia a “identificação única” do vírus

Qualquer que seja a tecnologia, o núcleo da identificação precisa é o bloqueio das “características insubstituíveis” do vírus da peste suína africana:

Alvo específico: todos os alvos são testados com o gene B646L altamente conservado do vírus, que está presente em todas as cepas do vírus da peste suína africana e tem poucas variações para garantir que não haja falhas ou erros de avaliação;

Ampliação do sinal: a amplificação de um ácido nucleico viral em traços milhões de vezes através de PCR ou RPA e a conversão de sinais por fluorescência, colóide e outros, tornando o “vírus invisível” um “resultado visível”;

Ligação específica: a ligação de anticorpos a antígenos, precursores e genes é como uma "correspondência de impressões digitais", respondendo apenas ao vírus da peste suína africana, eliminando falsos positivos causados ​​pela poluição cruzada da fonte.

Uma fazenda de suínos em Henan sofreu perdas de mais de 100.000 yuans devido ao uso de equipamentos não qualificados. A precisão do equipamento não depende apenas do tipo de tecnologia, mas também está estreitamente relacionada à seleção do alvo e à qualidade do reagente. Para os agricultores, a compreensão desses princípios técnicos permite determinar com mais clareza se o equipamento está adequado às necessidades de triagem de emergência para a seleção de colóides, diagnóstico preciso por PCR e teste em lote eficiente para a nova tecnologia RPA-CRISPR.