293 HEK-293 (células renais embrionárias humanas)

293 HEK-293 (células renais embrionárias humanas)

Não.Hek293; HEK-293; HEK 293; HEK:293; 293; 293 HEK; Rim embrionário humano 293

Esquema de cultivo A (padrão)

Médio de crescimento:

MEM (ATCC melhorado) + 10% FBS + 1% P/S

Condições de cultivo:

Fase gás: ar, 95%; CO2， 5%, temperatura: 37°C

AtençãoA parede da célula é solta, por favor, seja o mais suave possível durante a operação; O meio de cultura deve ser pré-aquecido durante a troca de líquido; Se houver grandes blocos de células que caíram, como fenômeno normal, por favor, siga as precauções de recepção.

Referências (Fonte)

A descrição de fundo é uma célula perenne formada por células renais embrionárias humanas transfectadas pelo adenovírus humano 5 (Ad5) cortado que contém e expressa o gene Ad5 transfectado. Os primeiros relatórios indicavam que o genoma continha DNA no extremo esquerdo e no extremo direito do genoma do adenovírus 5 (Ad5), mas agora é claro que apenas o DNA do extremo esquerdo existe. Após a sequência clonal do ponto de inserção de Ad5, os nucleótidos lineares de 1-4344 bits de Ad5 foram integrados no cromossomo 19 (19q13.2). O receptor de superfície celular que pode expressar anormalmente a bolina é o hospedeiro da amplificação do veículo adenovírus humano, composto por sub-unidades de integrina beta 1 e receptor de bolina α-v.

Idade (Sexo)O feto

Fontes organizacionaisrins; Transformação do ADN do adenovírus 5

Tipo de célulaLinhas celulares transformadas

Nível de BiosegurançaBSL-2

Tempo multiplicado~ 24-30 horas

OncologênicoSim, forma tumores em ratos nus.

Expressão do receptorvitronectina

Instituições de conservaçãoATCC; CRL-1573 ATCC: PTA-4488 DSMZ: ACC-305 ECACC: 85120602

Tratamento celular:

1) Recuperação de células congeladas: descongelar rapidamente o tubo de congelamento que contém 1mL de suspensão celular em banho de água a 37 ° C, adicionando-o a um tubo centrífugo que contém 4-6mL de meio de cultura para misturar uniformemente. Centrifuge 3-5min em condições de 1000RPM, descarte o líquido superior e ressuspenda as células no meio de cultura. Em seguida, a suspensão celular é adicionada a uma garrafa de cultura (ou prato) com meio de cultura de 6-8 ml para uma cultura de 37 ° C durante a noite. No dia seguinte, o crescimento celular e a densidade celular foram observados sob o microscópio.

2) Transmissão celular: se a densidade celular chegar a 70% -90%, a cultura de transmissão pode ser realizada. A célula é uma célula suspensa e ligeiramente adesiva, e a transmissão pode ser feita com referência aos seguintes métodos:

Coleta: coleta as células suspensas na garrafa de cultura para o tubo centrífugo. Lave as células 1-2 vezes com PBS sem íons de cálcio e magnésio. Como a parede celular não é firme após a lubrificação do PBS, as células se desprendem, então o PBS também deve ser reciclado no tubo centrífugo.

Adicionar 0,25% (w / v) 0,53 mM EDTA na garrafa de cultura (garrafa T25 1-2 mL, garrafa T75 2-3 mL) colocado em uma caixa de cultura de 37 ° C para digerir por 1-2 minutos (as células difíceis de digerir podem prolongar adequadamente o tempo de digestão), em seguida, observar a digestão celular sob o microscópio, se a maioria das células se arredondar e cair rapidamente para recuperar a mesa de operação, bater alguns toques na garrafa e adicionar 3-4 ml de meio contendo 10% FBS para terminar a digestão.

3, as células em suspensão coletadas, as células no líquido de limpeza pbs e as células de parede digeridas são centrifugadas em 1000rpml por 5min, descartar a limpeza superior, adicionar 1-2mL de líquido de cultura e re-suspensão e misturar a suspensão celular em proporção de 1: 2 em uma nova garrafa T25, adicionar 6-8ml de acordo com as instruções de configuração do novo meio de cultura para manter a vitalidade do crescimento das células, a transmissão posterior é realizada de acordo com a situação real em proporção de 1: 2 ~ 1: 5.

3) Congelação celular: após a recepção das células, é recomendado congelar um lote de sementes celulares nas primeiras 3 gerações para uso experimental posterior. Exemplos de garrafas T25:

Quando as células são congeladas, de acordo com o processo de transmissão celular, as células digeridas são coletadas no tubo centrífugo, e a contagem da placa de contagem de células sanguíneas pode ser usada para determinar a densidade de congelamento das células. A densidade de congelamento recomendada para células gerais é de 1 x 106 ~ 1 x 107 células vivas / ml.

2, 1000rpm centrífuga 3-5min, remover a clara superior. Suspender as células com o congelador celular preparado, por cada 1 ml de congelador contém 1 x 106 ~ 1 x 107 células vivas / ml distribuído para um tubo de congelamento para distribuir as células para o tubo de congelamento, marcar o nome, álgebra, data e outras informações.

Coloque as células a congelar na caixa de refrigeração do programa durante a noite em um frigorífico de -80 graus, depois transferido para um recipiente de nitrogênio líquido para armazenar. Registre também a localização do tubo de congelamento no recipiente de nitrogênio líquido para consulta e uso posterior.

Passos operacionais:

Passo 1: Tire o congelado sem soro do frigorífico para uso

Etapa 2: Centrífuga para coletar células logarítmicas (células de parede pega para digerir e centrifugar, células suspensas para centrifugar diretamente, velocidade de rotação 1200 rpm ou 250g, tempo 3min)

Passo 3: Eliminar o soro, adicionar a quantidade adequada de líquido congelado sem soro e ressuspender as células

Passo 4: Divida a quantidade de 1 ~ 1.5mL / tubo no tubo de congelamento, aperte a tampa do tubo e marque bem

Passo 5: Mova o tubo de congelamento diretamente para o frigorífico de -80 ° C e transfira-o para o nitrogênio líquido para conservação a longo prazo após 24 horas

Quando não houver caixa de congelamento ou líquido de congelamento não programado, é possível escolher o resfriamento em gradiente manual. No entanto, o resfriamento de gradiente manual não é aplicável a todas as células e o efeito é instável e também requer um teste de congelamento primeiro.

Atenção:

Depois de receber as células, se o gelo seco for descoberto volátil e limpo, a tampa da garrafa de congelamento cair, quebrar e as células estão contaminadas, entre em contato conosco imediatamente.

As células recebidas não abrem a tampa da garrafa, o corpo da garrafa limpa o álcool e coloca-o em uma caixa de cultivo por 2-4 horas (dependendo da densidade celular) para estabilizar o estado celular. Em seguida, observar o crescimento celular sob o microscópio invertido e tirar fotos de múltiplos diferentes das células (recomenda-se tirar uma foto da aparência geral das células ao receber, observar a cor do meio de cultura e se há vazamento, em seguida, tirar o estado das células sob o microscópio, 100 * e 200 * cada), observar se as células estão contaminadas durante o transporte. como base para nossas vendas.

Como o estado da célula é afetado por vários fatores como ambiente, operação e transporte, a empresa só garante que o cliente receba a célula dentro de uma semana após o estado da célula, então o cliente precisa apresentar a prova de recepção da célula após a venda e o cliente fornece o tempo de recepção e a prova de comunicação do pessoal de atendimento ao cliente após a descoberta do problema, o intervalo de tempo não pode ser maior que 7 dias.

Todas as células animais são consideradas potencialmente biológicamente perigosas, devem ser operadas dentro de um banco de biossegurança de nível secundário e, por favor, preste atenção à proteção, todos os resíduos e utensílios que entraram em contato com esta célula devem ser esterilizados antes de serem descartados.
Produtos que a empresa está vendendo:

Fibrocitos musculoesqueléticos de rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células precursoras da dendrite do rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células precursoras dendritais de ratos5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células-tronco hematopoiéticas da medula óssea do rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células cartilaginosas de ratos5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Gengiva de Rato Fibrocitos5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Linfocitos sanguíneos periféricos em ratos5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células musculares lisos da membrana intestinal do rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células musculares lisos nas artérias do pescoço do rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células de papilas de pele real do rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células-tronco metabólicas interembrionárias de ratos5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células de Purkenfield de Rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células-tronco nervosas da medula espinhal do rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células-tronco embrionárias de ratos5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células neurônicas triplicas de rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células perivasculares da retina do rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células-tronco da medula dental de rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células nucleares individuais da medula óssea do rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Fibrocitos de membrana branca do pênis de rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células neurônicas triplicas do rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células do olfato do rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Fibrocitos da parede vaginal do rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células cartilaginosas do quadril do rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

293 HEK-293 (células renais embrionárias humanas) Células do músculo filantrópico do rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células Pukenfield de Rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Fibrocitos de camundongos5×105Cells/T25 garrafa de cultura

Células-tronco embrionárias de rato5×105Cells/T25 garrafa de cultura