Proteína recombinante do fator A1 (HTRA1)

Factores de demanda de alta temperaturaProteína recombinante A1 (HTRA1)

Nome do produto: Factor de demanda de alta temperaturaProteína recombinante A1 (HTRA1)

Nome em inglês:Factor de Requisitos de Alta Temperatura Recombinante A1 (HTRA1)

HtrA; L56; ORF480; PRSS11; HtrA serina peptidase 1; Protease, serina, 11; IGFBP5-Protease; Requisito de alta temperatura A serina peptidase 1

Modelo:CS-D003

Enzimas e quinases

Espécies:Homo sapiens (humano)

Fonte: Expressão nuclear

anfitriãoE. coli

Nível de endotoxinas:< 1,0 EU/μg (medição LAL)

Localização subcelular: secreção, citoplasma

Peso molecular previsto:47.2kDa

Peso molecular real:47kDa (para análise de diferenças, consulte as instruções)

Fragmentos e etiquetas:Gly204~Leu364 com N-terminal seu e GST Tag

Composição do tampão:Tris 20mM, tampão NaCl 150mM (pH 8,0, contém EDTA 1mM, DTT 1mM, SKL 0,01%, Trehalose 5% e Proclin300)

Características: pó congelado

Pureza:> 90%

Ponto de espera:6.6

Aplicação:Controle Positivo; Imunogênio; SDS-PAGE; O WB.

Especificações:10μg50μg200μg1mg5mg

1. extração de proteínas

1) Equipamento necessário: máquina de fazer gelo, caneta de marcação, dois conjuntos de tubos EP de 1,5 ml (tratamento de alta temperatura e alta pressão), uma caixa de gelo grande, uma caixa de tubos EP de 1,5 ml, luvas, cortes oculares (tratamento de alta temperatura e alta pressão), tecido fresco ou armazenado em -80 ° C no frigorífico, PBS armazenado em 4 ° C no frigorífico (tratamento de alta temperatura e alta pressão), pistola de pipeta, cabeça de aspiração (tratamento de alta temperatura e alta pressão), dois conjuntos de barras de moagem (tratamento de alta temperatura e alta pressão), centrífuga de mão, papel de filtro, solução de desinfecção tripla, flúor de benzilsulfato (PMSF, um inibidor de protease, altamente tóxico), centrífuga, copo, tampão de gel 2 x SDS, DTT, oscilador, placa de espuma.

a) Mecanismo de fabricação de gelo;

b. caneta de marcação para marcar dois conjuntos de tubos EP;

c. coloque a caixa de gelo grande, caixa de tubo EP no gelo, um conjunto de canetas marcadas para o tubo EP colocado na caixa de gelo grande, outro conjunto de canetas marcadas para o tubo EP colocado na caixa de tubo EP, use luvas, leve a caixa de tubo EP, corte ocular do tamanho da soja (cerca de 100 mg) tecido fresco ou guardar no frigorífico de -80 ° C;

d. Retire o PBS armazenado no frigorífico de 4 ℃, adicione 1 ml de PBS ao tubo EP, corte ocular e corte do tecido (ação rápida), centrifuge no palmar, descarte a limpeza superior, adicione 1 ml de PBS ao tubo EP, moe a barra, centrifuge 3000 rotações por 10 minutos, descarte a limpeza superior, o papel filtro absorva o líquido residual da abertura do tubo o mais seco possível, estime o volume de sedimentos no tubo EP, os passos acima operam no gelo o mais possível;

e. remover o trio de desintegração do refrigerador de 4 ° C, remover o PMSF do refrigerador de -20 ° C colocado em uma caixa de gelo grande, gotejando o sedimento no tubo EP com 3-5 vezes o volume do trio de desintegração (geralmente 5 vezes), adicionando o PMSF (a proporção dos dois é de 94: 6), moendo a barra de moagem (20-30 minutos de desintegração completa no gelo), todas as etapas acima devem ser realizadas;

f. a centrífuga é pré-refrigerada, o líquido de tecido será completamente fissado após 4 ° C, 10.000 rotações centrífugas por 10 minutos;

g. Lavar o copo com água da torneira, derramar em água a vapor e ferver no forno elétrico;

h. Preparar o tampão de amostragem de gel 2 x SDS (armazenado a temperatura normal), remover o DTT armazenado no frigorífico de -20 ℃, colocar em uma caixa de gelo grande, aspirar o líquido superior após centrifugação com uma pistola de pipeta para outro conjunto de tubos EP (não aspirar os sedimentos inferiores), pressionar o líquido superior: 2 x SDS: DTT = 1: 0,8: 0,2 adicionar 2 x SDS e DTT, centrifugar na mão, em seguida, inserir cuidadosamente o tubo EP na placa de espuma, colocar no copo fervido para cozinhar por 6-8 minutos (a potência do forno não seja ajustada demais para evitar que a tampa do tubo exploda);

i. Retire a placa de espuma com uma pinça, arrefeca-a em uma caixa de gelo grande por 10 minutos, centrifuge-a no palmo e coloque-a no frigorífico de -20 ° C para guardar em reposição.

Nota: O lito também pode ser escolhido para descontaminar o lito ou o lito celular, conforme apropriado.

2, extração de proteína celular adesiva (o conteúdo de proteína celular é geralmente de cerca de 1x10-9mg / célula)

1) Equipamento necessário: máquina de fazer gelo, raspador de células, caneta de marcação, dois conjuntos de tubos EP de 1,5 ml (tratamento de alta temperatura e alta pressão), duas grandes caixas de gelo, luvas, garrafas de cultivo cheias de células, PBS armazenado em frigorífico de 4 ° C, solução de desinfecção tripla, flúor de benzilsulfato (PMSF, um inibidor de protease, altamente tóxico), pistola de pipeta, aspirador (tratamento de alta temperatura e alta pressão), papel de filtro, centrífuga, copo, tampão de gel 4 x SDS, disulfoglicol (DTT), placa de espuma.