Kit de contagem de células-8 Kit de teste de prolifera??o celular

Kit de contagem de células-8 (CCK-8)

Número do produto: C6005M

Especificações: 500T

Condições de armazenamento:4℃Proteção contra a luz, armazenamento a longo prazo-20℃，Expiração da embalagem。

Introdução do produto:

Contagem de células Kit-8Nome abreviadoCCK8(ouO WST-8O teste é baseado emO WST-8(Nome químico:2-(2-Metoxil-4-Nitrofenilo)-3-(4-Nitrofenilo)-5-(2,4-Disulfobenzo)-2H-As reações de coloração de tetrazol monosódio) são amplamente usadas em kits de detecção de alta sensibilidade rápida para proliferação celular e citotoxicidade.

O WST-8Princípio de funcionamento: sob as condições de presença de um reagente de acoplamento eletrônico, pode ser reduzido pela deshidrogenase na mitocôndria para gerar um produto amarelo laranja altamente solúvel em água (formazano）。 A cor é proporcional à proliferação celular e inversamente à citotoxicidade. Utilização de enzimas em450 nmDeterminação do comprimento de ondaODValores que refletem indiretamente o número de células vivas.

O WST-8Sim, sim.MTTum produto alternativo atualizado, eMTTOu qualquer outra coisa.MTTProdutos semelhantes comoXTT、MTSHá vantagens claras em comparação. Primeiro,MTTA metália gerada pela redução de algumas deshidrogenases nas mitocôndrias não é solúvel em água e precisa de uma solução específica para se dissolver; EO WST-8、XTTeMTSA molécula produzida é solúvel em água, o que evita as etapas de dissolução subsequentes. Em segundo lugar,O WST-8Comparações produzidasXTTeMTSA armadura produzida é mais fácil de dissolver. Mais uma vez,O WST-8do queXTTeMTSÉ mais estável, tornando os resultados experimentais mais estáveis. Além disso,O WST-8comMTT、XTTMais amplo do que o intervalo linear e maior sensibilidade.

CCKO método é amplamente utilizado em triagem de medicamentos, teste de proliferação celular, teste de citotoxicidade, teste de sensibilidade ao tumor e teste de atividade de fatores biológicos.

Uso:

1. Teste de atividade celular

（1(Em96 Suspensão celular em placa perfurada (100 microlitros/buracos), recomendado pode ser configurado8 Gradiente de concentração celular, cada configuração de concentração6 Repetir a placa de células, por exemplo, de acordo com o número de células0/312.5/625/1250/2500/5000/10000/20000 cells/96A placa do furo é pavimentada. Coloque a placa na caixa durante a noite (37℃,5% de CO2）。

（2Adicionar a cada buraco10 μL de CCKSolução (cuidado para não gerar bolhas nos buracos, eles podem afetarODvalores de leitura). Nota: Se o produto for retirado,37℃Tratamento de banho de água, não afeta o uso.

（3Incubar a placa na caixa de cultivo0.5 - 4 hNOTA: O experimento inicial pode ser realizado em0.5、1、2 e4 hEm seguida, o teste é realizado com um calibrador enzimático separadamente e, em seguida, um ponto de tempo com a faixa de absorção mais adequada é selecionado para experimentos posteriores.

（4Determinado com enzimáticos em450 nme600 nm(eliminando a interferência do fundo da placa de orifício). （5Se temporariamente não for determinadoODValores que podem ser adicionados a cada buraco10 μL 0,1 MdoHClsolução ou1% w/v SDSSolução e preservar a placa de cultivo a temperatura ambiente para evitar a luz.24 hNa medida interna, a absorção não muda.

2. Proliferação celular - teste de toxicidade

（1(Em96 Vacinação no buraco100 μLSuspensão celular, recomendado pode ser configurado8 Gradiente de concentração celular, cada configuração de concentração6 Repetir a placa de células, por exemplo, de acordo com o número de células0/312.5/625/1250/2500/5000/10000/20000 cells/96A placa do furo é pavimentada. Coloque a placa na caixa durante a noite (37℃, 5%CO2）

（2Adicionar ao painel de cultivo1 a 10 μLestímulos específicos da droga.

（3incubar em uma caixa de cultivo por algum tempo (por exemplo:6、12、24 ou48 h）。

（4Adicionar a cada buraco10 μL de CCKSolução (cuidado para não gerar bolhas nos buracos, eles podem afetarODvalores de leitura). Nota: Se o produto for retirado,37℃Tratamento de banho de água, não afeta o uso.

（5Incubar a placa na caixa de cultivo0.5 – 4 hNOTA: O experimento inicial pode ser realizado em0.5、1、2 e4 hEm seguida, o teste é realizado com um calibrador enzimático separadamente e, em seguida, um ponto de tempo com a faixa de absorção mais adequada é selecionado para experimentos posteriores.

（6Determinado com enzimáticos em450 nme600 nm(eliminando a interferência do fundo da placa de orifício).

（7Se temporariamente não for determinadoODValores que podem ser adicionados a cada buraco10 μL 0,1 MdoHClsolução ou1% w/v SDSA solução e cobrir a placa de cultivo para evitar a luz é mantida a temperatura ambiente.24 hNa medida interna, a absorção não muda.

NOTA: Se a substância a ser testada for oxidativa ou redutiva, pode ser adicionadaCCKAntes de substituir o meio fresco (remover o meio e lavar as células duas vezes com o meio e, em seguida, adicionar um novo meio), remover o efeito da droga. É claro que o efeito da droga é relativamente pequeno, não pode substituir o meio de cultura, deduzindo diretamente a absorção em branco do meio de cultura após a adição da droga.

3. Fórmula de cálculo

Taxa de sobrevivência celular=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]xTaxa de supressão=[(Ac-As)/(Ac-Ab)]xComo:buraco experimental(meios de cultura que contêm células,CCK-8Medicamentos a testar)AbsorçãoAc:buraco de controle(meios de cultura que contêm células,CCK-8Sem medicamentos a testar.)AbsorçãoAb:Buraco em branco(meios de cultura sem células e medicamentos a serem testados,CCK-8)Absorção

Precauções

1. Antes de usar, centrifuge o produto instantaneamente para o fundo do tubo e faça experimentos posteriores.

2. usar96Os buracos são colocados em placas celulares, se o tempo de cultivo for mais longo, certifique-se de prestar atenção ao problema da evaporação. Recomenda-se descartar o círculo ao redor, substituindo a mesma quantidadePBSágua ou líquido de cultivo.

3. Antes de testar com um calibrador enzimático, certifique-se de que não há bolhas em cada buraco, caso contrário, a medição será interferida.

4. Este produto é limitado a pesquisa científica e não deve ser usado para diagnóstico clínico ou tratamento, não deve ser usado em alimentos ou medicamentos e não deve ser armazenado em casas comuns.

5. Para sua segurança e saúde, por favor, use uma roupa experimental e use luvas descartáveis ​​para operar.