SU-DHL-10 linfocitos de células B humanas

SU-DHL-10 linfocitos de células B humanas

Todos os nossos produtos são apenas para experimentos científicos, não para uso fora de outros experimentos científicos!

Detalhes do produto:

Fonte: Humano

Sexo Idade:25Idade, Homem

Características de crescimento: Crescimento em suspensão

Forma celular: linfocito

Especificações celulares:1 x 106 células/T25ou1 milhaTubo de congelamento

Condições de cultivo:RPMI-1640 Médio+10% soro bovino fetal37℃5% de CO2

Condições de congelamento:90% FBS + 10% DMSO

Método de transmissão:1:3Geração, 2-3História1geração

Operações de cultura celular:

1) Recuperação de células:Os seguintes tratamentos de congelamento de culturas celulares são apenas para fins informativos, com as etapas operacionais específicas como instruções do produto fornecido.

O tubo de congelamento contendo 1 ml de suspensão celular é agitado rapidamente para descongelar em banho de água a 37 ° C, adicionando 4 ml de meio de cultura para misturar uniformemente. Centrifuge a 1.000 rpm por 3 min, descarte o líquido de supernatação e acrescente 1-2 ml de meio de cultura depois de soprar bem. Em seguida, todas as suspensões celulares são adicionadas a uma garrafa com uma quantidade moderada de meio para a cultura durante a noite (ou a suspensão celular é adicionada a um prato de 6 cm com cerca de 4 ml de meio para a cultura durante a noite). No terceiro dia, troce o líquido e verifique a densidade celular.

2) Transmissão celular:Se a densidade celular for de 80% a 90%, a cultura de transmissão pode ser realizada.

a、 Eliminar a cultura e lavar as células 1-2 vezes com PBS sem íons de cálcio e magnésio.

b、 Adicione 1 ml de líquido digestivo (0,25% Trypsin-0,02% EDTA) na garrafa para que o líquido digestivo penetre todas as células, coloque a garrafa em uma caixa de 37 ° C para digerir 1 -3min (dependendo da digestão celular), em seguida, observe a digestão celular sob o microscópio, se a maioria das células se arredondar e desmontar, rapidamente recuperar a mesa de operação, toque alguns toques na garrafa e adicione 2-3ml de meio para terminar a digestão. Depois de carregar suavemente em um tubo de centrifugação estéril, centrifugar por 1000 rpm por 5 min, descartar o líquido superior e adicionar 1-2 ml de líquido de cultura depois de soprar bem.

c、 Divida a suspensão celular em proporção 1: 2 em um novo prato ou garrafa com 8 ml de meio e coloque-a em uma caixa de cultura.

3) Congelação das células:Quando as células estão em bom estado de crescimento, as células podem ser congeladas. A garrafa T25 abaixo é um exemplo;

a、 Coleta as células e o líquido de cultura celular, carregar em um tubo de centrifugação estéril, centrifugar a 1000 rpm por 4 min, descartar o líquido de limpeza, limpar novamente com PBS, descartar o PBS, fazer a contagem de células.

b、 De acordo com o número de células adicionar líquido de congelamento de células sem soro, para que a densidade celular 5 × 106 ~ 1 × 107 / mL, misturar suavemente, cada tubo de congelamento congelar 1mL de suspensão celular, prestar atenção ao tubo de congelamento para a identificação.

c、 Coloque o tubo de congelamento em um frigorífico de -80 ° C e depois de 24 h para o armazenamento de nitrogênio líquido. Registre a localização do tubo de congelamento para a próxima coleta.

Atenção à cultura celular：

Um,Depois de receber as células, primeiro observe se a garrafa de células está intacta, se o líquido de cultura tem vazamento, turbidez e outros fenômenos, se o fenômeno acima ocorrer, entre em contato conosco prontamente.

Dois.Leia cuidadosamente as instruções de células para entender as informações relacionadas com as células, como a morfologia celular, o meio de cultura usado, a proporção sérica, as citocinas necessárias, etc., para garantir que as condições de cultura celular sejam consistentes, e se as condições de cultura não forem consistentes, a responsabilidade das células será assumida pelo próprio cliente.

Três.Limpe a superfície da garrafa com 75% de álcool e observe o estado da célula sob o microscópio. Devido a problemas de transporte, é normal que algumas células se fragmentem devido a mudanças de temperatura e a ruptura violenta. Depois de observar o bom estado das células, a parede da garrafa de desinfecção de 75% de álcool colocar a garrafa T25 em uma caixa de cultivo de 37 ° C para 2-4 h.

Quatro.As células adesivas podem ser digeridas, as células em suspensão são misturadas diretamente para coletar as células, 900 rpm-1000 rpm centrifugar por 3 min e descartar. Adicione 5 mL de PBS para ressuspender as células, centrifuge em seguida 900 rpm-1000 rpm por 3 min, ressuspenda as células com um meio fresco e injete-as em uma nova garrafa ou prato de petri e coloque-as em uma caixa para a cultura.

Cinco.Por favor, os clientes usam os mesmos meios para a cultura celular.

Seis. Recomendamos que os clientes tirem algumas fotos das células nos primeiros 3 dias após o recebimento das células, para registrar o estado das células e facilitar a comunicação com o nosso departamento técnico. As células sensíveis individuais podem ser instáveis ​​devido ao transporte, por favor, entre em contato conosco prontamente para informar sobre a situação específica das células para que nossos técnicos possam acompanhar a visita até que o problema seja resolvido.

Sete,As células são usadas apenas para pesquisa científica.

oito,Nota: o meio de cultura para transporte (meio de irrigação) não pode mais ser usado para cultivar células, por favor, substitua o meio de cultura recém-formulado de acordo com as condições de cultura de células do manual. A primeira transmissão após a recepção das células sugere a transmissão 1:2.

Nove,Observação: a transmissão 1:2 é 1 garrafa T25 para 2 garrafas T25 ou 2 pratos de 6 cm. Não 1 garrafa T25 passa por 2 pratos de 10 cm.

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