Células AKR

Nome do produto:Células AKR

Células AKRPós-tratamento

As células são cultivadas em garrafas em bom estado depois de encher o líquido de cultura e fechar a boca da garrafa é um meio de transporte celular. Depois de receber as células de volta ao seu laboratório, primeiro abra a embalagem externa.75% de álcool pulverizado para desinfetar toda a garrafa e colocado em uma mesa ultra-limpa, operação estritamente estéril，Posicionamento da caixa2-4 horas. Observação sob o espelho: não exceder80% de convergência, pode ser engarrafado líquido de culturaColeta para o tubo centrífugoNo meio, juntar-se6 ml de meio, colocar37℃, 5% CO2 incubadora cultura; Quando a convergência é superior a 80%, é transmitida ou congelada, dependendo das circunstâncias, para operações específicas, veja as etapas de cultura celular.（Observe que a entrega é selada garrafa de cultura, coloque no cultivo da caixa de cultura lembre-se de soltar a tampa da garrafa de cultura, após a geração, recomenda-se que uma garrafa use o meio de cultura dentro da garrafa original, outra garrafa use o meio de cultura próprio）

Células de câncer esofágico do rato AKRPassos de formação

Um,Recuperação de células: incluiráO tubo de congelamento de 1mL de suspensão celular é rapidamente agitado e descongelado em um banho de água de 37 ° C, adicionando 5mL de meio para misturar uniformemente. Centrifugar durante 5 minutos em 1000RPM, descartar o líquido superior e adicionar4-6em mLSopre bem depois do meio de cultura. Em seguida, adicionar toda a suspensão celular em uma garrafa de cultura durante a noite (ou adicionar a suspensão celularEm um prato de 6 cm）cultivo durante a noite. No dia seguinte, troce o líquido e verifique a densidade celular.

Dois.Transmissão celularSe a densidade celular80% a 90% podem ser cultivados.

a)Para as células adesivas, a transmissão pode se referir aos seguintes métodos:

1. Eliminar a cultura e lavar as células 1-2 vezes com PBS sem íons de cálcio e magnésio.

2. Adicionando1-2 ml de líquido digestivo (0.25% Trypsin-0,53 mM EDTA) em garrafas de cultura, colocado para digestão em uma caixa de cultura de 37 ° C1-2 minutosEm seguida, observar a digestão celular sob o microscópio, se a maioria das células se arredondar e cair, rapidamente recuperar a mesa de operação, bater alguns botões na garrafa de cultura e adicionarMais de 5mlcontém10% de soroO meio de cultura termina a digestão.

3. Sopre suavemente as células, aspirar após a queda, centrifugar em condições de 1000RPM por 8-10 minutos, descartar o líquido superior, adicionar 1-2mL de líquido de cultura depois de soprar bem.

4. Pressione5-6ml / garrafa de líquido de cultura suplementar para dividir a suspensão celular em uma proporção de 1: 2 para o novo conteúdo5-6ml de líquido de cultura em um novo prato ou garrafa.

b) O), eparaSuspenderA transmissão de células pode ser feita através dos seguintes métodos:

Método 1: coletar as células.Centrifugue em 1000RPM por 8-10 minutos, descarte o líquido limpo e, depois de adicionar 1-2ml de cultura, soprar bem e dividir a suspensão celular em uma proporção de 1: 2 a 1: 5 em um novo prato ou garrafa com meio de cultura de 8ml.

Método 2: você pode escolher metade do método de troca de fluido, depois de descartar metade do meio de cultura, suspender as células restantes e pressionar a suspensão celularA proporção de 1:2 a 1:3 é dividida em novos pratos ou garrafas com 8 ml de meio.

P.S.:Se o cliente receber2ml pequenas células tubulares, depois de receber as células, pulverizar todo o tubo com 75% de álcool e depois de ser desinfetado em uma mesa ultra-neta ou um armário de segurança, operação estritamente estéril; Transferir as células tubulares para uma garrafa de cultura T25 ou6cm prato de petri, adicionar5Misture o meio em torno de ml e coloque no recipiente durante a noite para ver a densidade celular após a cultura: se a densidade não for excedida80%, a troca de líquido continua a ser cultivada, transmitida ou congelada conforme o caso. Se a densidade exceder80%, pode ser transmitido diretamente (método idêntico).

Três.Congelação celular:（Nota: O método de congelamento de células sem líquido de congelamento de sangue, por favor, consulte o meu número de embarque:O C7001）

1、As células crescem para cobrir garrafas de culturaQuando 80% da área, descarte o líquido de cultura em uma garrafa de cultivo de 25 cm2 e limpe as células uma vez com PBS;

2、adicionarLiquido digestivo cerca de 1ml para a garrafa de cultura, observado sob o microscópio invertido, até que as células retornem ao círculo para adicionar o líquido de cultura para terminar a digestão, suavemente soprar as células para que caiam, em seguida, transferir a suspensão para o tubo de centrifugação de 15ml, 1000rpm centrifugação 5min;

3、Suspender as células com a quantidade adequada de líquido congelado e colocar em um tubo de congelamento;

4、Coloque primeiro o tubo de congelamento celular em-20 ° C 1.5h, em seguida, movê-lo para -80 ° C