Serviço de Experimentação do Sistema CRISPR/Cas12a

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Serviço Experimental do Sistema CRISPR/Cas12a: O CRISPR/Cas12a (antigamente conhecido como Cpf1) pertence ao sistema CRISPR Tipo V de Classe 2 e é um mecanismo imunológico adaptativo de bactérias e antigos para identificar e cortar o DNA de vírus ou plasmídeos invasores. Em comparação com o Cas9, o modelo de trabalho do DUT lhe dá vantagens significativas na edição de genes, testes moleculares e regulação multigênica.

Detalhes do produto

Um,Serviço de Experimentação do Sistema CRISPR/Cas12aDefinição de sistema e origem biológica

CRISPR/Cas12a (em inglês)(Nome original)Cpf1(pertenceSistema CRISPR Tipo V Classe 2É um mecanismo imunológico adaptativo de bactérias e antigos para identificar e cortar o DNA plasmódico ou vírus invasor. Em comparação com o Cas9, o modelo de trabalho do DUT lhe dá vantagens significativas na edição de genes, testes moleculares e regulação multigênica.

Dois.Serviço de Experimentação do Sistema CRISPR/Cas12aMecanismos moleculares e características técnicas

1) Processo de função

Comparação das principais características (Cas12a vs Cas9)

parâmetro	CRISPR/Cas12a (em inglês)	CRISPR/Cas9 (em inglês)
Tamanho da proteína	1.200-1.300 aminoácidos (menores)	1.000-1.600 aminoácidos
Dependência do RNA	apenascrRNA(sem tracrRNA)	NecessidadecrRNA + tracrRNAou quimeração de sgRNA
Processamento de crRNA	Atividade RNase autônoma (capacidade de processamento incorporada)	RNase III dependente do hospedeiro e tracrRNA
Tipo de extremidade de corte	黏性末端（5' 突出）	Final plano
Sequência de identificação PAM	5'-TTTN/TTTV-3'(rica em T)	5'-NGG-3'(rico em G)
Domínio estrutural da nucleosase	ÚnicoDomínio RuvC	Domínio duplo HNH + RuvC
Atividade de corte trans	Sim (corte não específico de ssDNA)	Nada

Notas：

O VRepresenta A/C/G (não T), como 5'-TTTA/TTTC/TTTG-3'.

黏性末端É mais fácil ativar a correção de recombinação homogênica (HDR) para melhorar a eficiência da edição precisa.

Vantagens e cenários de aplicação

1) Vantagens técnicas

Eficiência da edição multigênica：

Uma única matriz de crRNA pode alvejar vários genes simultaneamente, sem a necessidade de repetir a construção de tracrRNA, e é adequada para a regulação de vias complexas.

Adaptabilidade genômica enriquecida AT：

A edição de genomas ricos em AT, como plantas e parasitas, é significativamente mais eficiente do que Cas9.

Baixo risco fora de alvo：

Dependendo estritamente da ativação PAM, a atividade de corte trans pode ser desativada e a taxa de desdirecionamento de todo o genoma é menor do que Cas9.

Facilidade de entrega：

As proteínas são menores e mais fáceis de empacotar em veículos virales como AAV, o que torna-as adequadas para a terapia génica in vivo.

b) Áreas de aplicação principais

Direção de aplicação	Casos	Vantagens manifestadas
Eliminação Multigenética	Edição sincronizada de 3 genes resistentes à seca no milho com eficiência de edição > 60%	CrRNA Array Design simplificado
Inserção Genética Precisa	HDR aprimorado com extremidades viscosas para reparação de pontos fixados do gene yino coagulante humano FIX	Reparação de alta fidelidade
Diagnóstico molecular	Detecção de ácidos nucleicos em combinação com a atividade de corte trans (CRISPR-DETECT)	Alta sensibilidade, sem amplificação PCR
Pesquisa antiviral	Gene do receptor viral BmNPV editado em seda caseira, eficiência antiviral 40% maior do que Cas9	Corte eficiente na área de enriquecimento AT
Otimização de veículos de terapia genética	Cas12b (variante menor) com taxa de desdirecionamento 50% menor do que Cas9, adequado para uso clínico	Entrega de alta segurança

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