Modelos Animais Talens

NegociávelAtualização em03/04

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Visão geral

A construção de modelos animais TALENs é um modelo animal experimental construído usando a tecnologia de edição de genes TALENs. Os TALENs permitem a edição precisa do genoma através da fusão do domínio de ligação do DNA do Efeitor Ativador de Transcrição (TALE) com o domínio de corte da nucleosase (FokI).

Detalhes do produto

Modelos Animais Talens

Princípios técnicos e avanços fundamentais da TALENS

1) Projeto estrutural e mecanismo de ação

Talens (Transcription Activator-Like Effector Nucleases) sãoNucleatase artificialmente engenhadaConsiste em duas partes:

Domínio de identificação de DNA (proteína TALE)：

por34 unidades repetitivas de aminoácidosComposição, cada unidade passaAminoácidos variáveis em posições 12 e 13 (RVDs)Identificação específica de bases individuais:

Tipo RVD	Identificação da base	Força combinada
NI	Um	Alta especificidade
NG	O T	Alta especificidade
HD	O C	Alta especificidade
NN	G / A	Reconhecimento cruzado

O comprimento da sequência é geralmente15-20 bpGarantir a uniformidade de WEI alvo.

Domínio de corte de DNA (FokI nuclease)：

É necessário formarDiómeroPara cortar o DNA, os TALENs precisam ser projetados em pares (braço esquerdo e direito) e o local de corte está localizado entre os braços (a área de intervalo geralmente é de 12 a 20 bp).

2) Mecanismo de edição genética

Quebra de cadeia dupla (DSB)：

TALE liga a sequência alvo → FokI polimerização → corte de dupla cadeia de DNA.

Reparar Caminho：

Conexão terminal não homogênica (NHEJ)Inserção aleatória / ausência (Indels), que resulta em knockout genético.
Reparação direcionada homogênica (HDR)Modelos de reparação de origem externa são necessários para inserções precisas ou mutações pontuais.

avanço tecnológicoshu realizaçãoQualquer local do genomaCorte preciso e taxa de desvio inferior à tecnologia ZFN anterior.

Dois.Modelos Animais TalensProcesso de construção

a) Etapas operacionais padronizadas

Otimização das principais tecnologias

Passos	Operações principais	Soluções inovadoras
Projeto de alvo	Evite sequências duplicadas / áreas de metilação, com intervalos otimizados para 14-18 bp	O TALEN Targeter aumenta a taxa de sucesso
Montagem de módulos	Clonagem do Golden Gate：

6 módulos em série (+63 arquitetura)
Conexão de corte enzimático (BsaI/BsmBI) | Construção concluída em 6 dias, 5 vezes maior eficiência |
|Carreira de expressãoVeedor duplo iniciador de mamíferos (CMV/T7) para suportar a transfecção celular e a síntese de mRNA Adaptado para aplicações de várias espécies (peixe zebra, camundongos, células iPS humanas)
|Verificação Ativa| Sistema híbrido único levedura ou teste genético de relatório celular | Alternativa de alvejamento de células ES demoradas, ciclo reduzido para 1 semana |
|Entrega de embriõesMicroinjeção de óvulos fertilizados:
mRNA: Produto de transcrição in vitro da TALENs
Complexo de RNP: Complexo de proteína TALE-FokI | RNP reduz efeitos off-target e aumenta a segurança

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