Serviços técnicos de alvo ES

Um,Serviços técnicos de alvo ESDefinições técnicas e princípios fundamentais

Tecnologia de alvo ESÉ um método de edição genética baseado na recombinação homógena de células tronco embrionárias (ES) que permite modificações precisas como knockout genético (KO), knockout condicional (CKO), knockout genético (KI) e mutações pontuais (PM) integrando o DNA externo em locais específicos do genoma. Seus princípios fundamentais incluem:

1. Mecanismo de reorganização homogênica：

• O design incluiBraço idênticoO veículo (homogênico com o gene alvo) insere sequências exogênicas (por exemplo, genes marcadores de triagem) no local alvo através da recombinação homogênica.

2. Sistema de filtragem positiva e negativa：

• A filtrar as marcas(por exemplo, Neo): Inserir a região homogênica para triagem de células ES recombinadas com sucesso.

• Marca de filtragem negativa(por exemplo, HSV-tk / DTA): localizado no lado externo do braço homogênico, eliminando as células inseridas aleatoriamente.

3. Omnipotencia das células tronco embrionárias：

• As células ES modificadas foram injetadas em embriões cisticos, que se desenvolveram em ratos quiméricos (F0), obtendo um modelo genético estável através da transmissão da linhagem reprodutiva.

Posicionamento técnicoTargeting ES é o padrão de ouro da era pré-CRISPR, especialmente paraEdição de grandes segmentos(>10 KB) eModificações genéticas complexas(como eliminação condicional).

Dois.Serviços técnicos de alvo ESProcessos operacionais padronizados e inovação tecnológica

Processo de segmentação tradicional (7-12 meses)

Passos-chave de análise：

1. Construção de veículos：

• O comprimento do braço homogênico é geralmente de 3-5 kb e a inserção de grandes segmentos requer um portador BAC.

2. Seleção de Linhas Celulares ES：

• Categorias de uso comum: 129S6/SvEvTac (alta eficiência de recombinação), C57BL/6N (fundo puro).

3. Preparação da quimera：

• A taxa de quimerização após a injeção cistoembrônica é de cerca de 20-70% e é necessária uma triagem intuitiva através de marcadores de cabelo, como o hospedeiro de branqueamento.

Inovação tecnológica: alvo de células EPS

Células EPSCélulas-tronco pluripotentes estendidas (Extended Pluripotent Stem Cells) foram relatadas em 2017 por cientistas do nosso país e suas vantagens incluem:

1. Aumento da eficiência：

• Targeting eficiência até as células ES tradicionais10-100 vezes- É.

2. Redução do ciclo：

• A quimera é obtida em um passo, poupando 3 meses de transmissão da linhagem.

3. Melhoria omnipotente：

• A injeção de uma única célula em um embrião cistico pode produzir 99,99% da quimera.