Células epiteliais endometriais humanas

separação do epitêlio endometrial humano do tecido do útero; O útero é o órgão de concepção do feto, localizado no centro da pélvis, entre a bexiga e o recto, e sua localização pode variar de acordo com o nível de enchimento ou postura da bexiga e do recto. A posição normal do útero depende principalmente da manutenção de estruturas como ligamentos do útero, pelvis, vaginas genitais e tendões do centro do gênero, que podem causar degeneração do útero quando danificadas ou relaxadas. A endometria é a membrana mucosa, composta pela epitelia (pertencente à epitelia de coluna de camada única, com células secretoras e filarócitos) e a membrana inerente (composta por tecido ligativo, que tem um grande número de células estelares, chamadas células matrizes), a endometria pode ser dividida em uma membrana funcional superficial e uma camada fundamental profunda, a camada funcional é mais espessa, representando aproximadamente a espessura da endometria.4/5； A camada de fundo é mais fina e densa, representando cerca de 1/5, a camada funcional pode ser retirada, enquanto a camada de fundo não pode ser retirada. A função principal das células epiteliais da endometria: 1 A endometria também é chamada de mucosa do útero, refere-se à camada que constitui a parede interna do útero de mamíferos; A endometria responde tanto à emolina quanto à progesterona e, portanto, pode ocorrer mudanças significativas com o ciclo sexual (ciclos eróticos, ciclos menstruais). A endometria está intimamente relacionada com a implantação embrionária e ocupa um lugar importante no estudo da fisiologia reprodutiva. No processo de "diálogo" entre o embrião e a mãe, as células epiteliais da endometria do útero desempenham um papel extremamente importante. A endometria, que constitui a camada mais interna da parede do útero de mamíferos fêmeas, está localizada na cavidade do útero e ocupa um lugar importante na atividade fisiológica reprodutiva dos animais. O útero e a endometria são órgãos importantes para manter a função fisiológica e a fertilidade das fêmeas, e a reparação regenerativa da endometria é uma função fisiológica importante do útero. As células epiteliais endometriais cultivadas in vitro são importantes para o estudo de suas funções fisiológicas, efeitos farmacológicos e alterações patofisiológicas sob a ação de vários fatores patogênicos.
Descrição do método:

O laboratório da empresa isola o epitelio endometrial humano usando a digestão da colagenase, em combinação com a preparação de triagem de cultura de meio específico de células epiteliais, o número total de células é de aproximadamente5×10? células/garrafas.
Teste de qualidade:

Laboratório da empresa isola epitelia endometrial humanaA citokeratina-19 é imunofluorescente, com pureza superior a 90%, e não contém HIV-1, HBV, HCV, brancos, bactérias, leveduras e fungos.

Todos os nossos produtos são apenas para experimentos científicos, não para uso fora de outros experimentos científicos!

Condições do pacote Colágeno de cauda de ratoI (2-5 μg/cm2)

Meio de Cultura contémFBS、 Aditivos de crescimento, penicilina, estreptomicina, etc.

Frequência de troca de líquido cada2-3 dias de troca de líquido

Características de crescimento Colar na parede

Forma celular Tipo de células epiteliais

Características de transmissão Transmissível2-3 gerações

Liquido digestivo 0,25% Yi Protease

Condições de cultivo Gas: ar,95%； CO2, 5%

Preparação

Preparação do equipamento experimental: preparação de pratos de petri estériles, garrafas de cultivo, pipetas, centrífugas, instrumentos cirúrgicos, etc., e esterilização de alta pressão ou outro tratamento de desinfecção adequado.

2. Preparação de reagentes: preparação ou compra de meios de cultura adequados, enzimas digestivas (por exemplo, colagenase, etc.), soros fetais de bovinos, reagentes duplos, etc., para garantir que sejam estériles e dentro do prazo de validade.

Preparação de fontes de tecidos ou animais experimentais: selecionar o animal adequado e realizar a anestesia ou execução correspondente, de acordo com as necessidades experimentais, para obter o tecido desejado; Ou obter a organização a partir de uma biblioteca de amostras de organização existente.

Recolha e tratamento

1. extração: em condições estériles, remover rapidamente o tecido alvo, minimizar os danos ao tecido e remover o excesso de gordura, tecido conjuntivo e outros tecidos não destinados.

Limpeza: o tecido removido será lavado várias vezes com PBS estéril pré-refrigerado para remover sangue e impurezas.

Corte: corte o tecido em pequenos pedaços de cerca de 1 - 2 mm³ para a digestão posterior.

Separação celular

1. Digestão: coloque os blocos de tecido cortados em um tubo centrífugo contendo quantidades adequadas de enzimas digestivas e digera por um tempo em um leito de agitação térmica estática de 37 ° C ou um cultivo. O tubo centrífugo pode ser agitado suavemente durante o período para tornar a digestão mais uniforme.

Terminar a digestão: quando a maioria dos blocos de tecido é digerida em suspensão de células individuais ou grupos de células pequenas, a adição de meio contendo soro termina a digestão.

Filtração e centrifugação: filtre a suspensão celular com uma seta celular para remover os fragmentos de tecido não digeridos e centrifuge o filtro à velocidade de rotação apropriada para coletar o precipitado celular.

Observação e teste celular

Observação diária: todos os dias com o microscópio invertido para observar a forma das células, o estado de crescimento, a densidade, etc., para registrar as mudanças das células, como a descoberta de poluição celular ou anormalidade, tomar as medidas adequadas em tempo útil.
Contagem celular e teste de vitalidade: quando necessário, pode ser usado para contar e testar a vitalidade das células com métodos como a coloração azul taipan para entender o crescimento das células e o estado de saúde.

I. Recolha e separação

1. Operação rápida

O tecido deve ser tratado imediatamente após a coleta para evitar a exposição prolongada a temperatura ambiente ou ambientes não nutritivos.

- Use PBS estéril ou água salina fisiológica para lavar os tecidos para remover sangue e impurezas.

2. Seleção de enzimas digestivas

- Escolha enzimas digestivas de acordo com o tipo de tecido para evitar que a digestão excessiva cause danos celulares.

O tempo de digestão é rigorosamente controlado (geralmente 10-30 minutos) e o estado de dissolução das células pode ser observado pelo microscópio.

Otimização das condições de cultivo

1. Escolha do meio

Usando meios que contêm soros ou fatores de crescimento específicos (por exemplo, DMEM, RPMI 1640, etc.), algumas células precisam adicionar insulina, EGF, etc.

- Evitar a substituição frequente de marcas ou lotes de mídia para reduzir o estresse de adaptação celular.

2. Paredes e transmissão

- A capacidade de adesão das células primitivas é fraca e pode exigir embalagem em pratos de petri (por exemplo, colágeno, polilisina).

A densidade é recomendada para ser controlada entre 70% e 80% durante a transmissão, e a convergência excessiva pode levar à inibição e diferenciação do contato.

III. Controle da Poluição

1. Operação estéril

- Operação em uma mesa ultra-neta durante todo o processo, usando materiais de consumo descartáveis ​​para evitar a poluição cruzada.

- Dual-anti pode ser adicionado ao meio de cultura, mas o uso a longo prazo pode afetar a atividade celular.

2. Teste de broncógenos

- Detecção regular de contaminação por brocênios (por exemplo, PCR), eliminação oportuna das células após a contaminação.

IV. Monitoramento de Estado

1. Observação diária

Verifique a morfologia celular, a densidade e a cor do meio diariamente para substituir o meio em tempo útil (geralmente a cada 2-3 dias).

Morfologia anormal (por exemplo, redondecimento celular, aumento de fragmentos) pode indicar poluição ou deficiência nutricional.

2. Transmissão e congelamento

O número limitado de divisões das células progenitoras (geralmente 5-10 gerações) requer o congelamento oportuno das células progenitoras.

- O líquido congelado é recomendado para o uso de soro DMSO + (ou meio de congelação dedicado), conservação de nitrogênio líquido após o resfriamento gradiente.