Kit de RT-PCR por fluorescência quantitativa por sondagem do vírus da hepatite do rato Linhas celulares

[Nome do produto]Quantificação fluorescente por sondagem do vírus da hepatite em ratos Kit RT-PCR

Nome：MouseHepatiteVirus(MHV)ProbegRT-PCRKit

[Especificações da embalagem]50 vezes / caixa

【uso previsto)Vírus da hepatite em ratos(MouseHepatitisVirus, MHV) é um vírus de RNA, o vírus está presente no sangue e nos órgãos internos, especialmente no fígado e nos rins, também encontrado na urina, para ratos jovens é altamente infeccioso, a hepatite do rato é causada pelo MHV 1 tipo de doença infecciosa, ratos venenosos distribuídos, mas em circunstâncias normais, a maioria das infecções são insignificantes, apenas sob a estimulação de fatores de estresse pode tornar-se uma doença mortal, principalmente para hepatite e encefalite, portanto, a identificação rápida e precisa do vírus da hepatite do rato tem um papel importante na prevenção e quarentena da doença. Este produto é um kit desenvolvido com base na tecnologia RT-PCR quantitativa por fluorescência por sonda para detectar o vírus da hepatite em ratos, e tem as seguintes características:

1. pronto para usar, o usuário só precisa fornecer um modelo de RNA de amostra.

2. O introdutor e a sonda são otimizados, com alta sensibilidade.

Fornecer controle positivo para facilitar a distinção de amostras falsas negativas.

Alta especificidade, o precursor é projetado com base na área altamente conservada do vírus da hepatite do rato e não interage com o RNA de outros vírus.

Este produto é suficiente para 50 vezes a reação RT-PCR por fluorescência quantificada por sonda de sistema de 20 μL.

Este produto só pode ser usado para pesquisa científica.

[Especificações e Composições]

【Transporte e conservação]Transporte a baixa temperatura,Conservar a -20 ° C, o período de conservação é de 12 meses.

【Reagentes próprios]amostras O RNa.

Kit de fluorescência RT-PCR quantitativa por sondagem do vírus da hepatite do rato[Método de uso]I. Dilução de amostras de curva padrão (Tome as 6 cópias 10E2-10E6 / μL como exemplo) Como a concentração padrão é muito alta, as seguintes operações de diluição devem ser realizadas em áreas separadas e nunca contaminar a amostra ou outros componentes deste kit. Para aumentar a estabilidade do produto e evitar a propagação de patógenos infecciosos, este produto não fornece amostras vivas como controle positivo, apenas fragmentos de DNA não infecciosos como controle positivo.

Marce 6 tubos centrífugos, 6, 5, 4, 3, 2 e 1, respectivamente.

2. Adicione 45 μL de diluição de modelo para PCR fluorescente com a cabeça de pistola de núcleo (preferivelmente com a cabeça de pistola de núcleo, o mesmo abaixo).

Adicione um controle positivo de 5 μL1 x 10E7 cópias/μL (fornecido no kit) no tubo 6 e agite completamente durante 1 minuto para obter uma amostra de curva padrão de 1 x 10E6 cópias/μL. Coloque no gelo.

4. trocar a cabeça da pistola, no tubo 5, adicionar o controle positivo de 5μL1 × 10E6 cópias / μL (resultado da diluição anterior), agitar completamente por 1 minuto para obter uma amostra de curva padrão de 1 × 10E5 cópias / μL. Coloque no gelo.

5. trocar a cabeça da pistola, adicionar o controle positivo de 5μL1 × 10E5 cópia / μL no tubo 4 (resultado da diluição anterior), agitar completamente por 1 minuto para obter uma amostra de curva padrão de 1 × 10E4 cópia / μL. Coloque no gelo.

Repita a operação acima até obter uma amostra de curva padrão de 6 diluições. Coloque no gelo.

II. Amostras RNAPreparação

7 . Se houver N amostras, é melhor definir N + 2 extrações, uma das quais é PC (preparação de amostra para controle positivo) e uma é NC (preparação de amostra para controle negativo). A diluição 10.000 vezes, que pode ser controlada positivamente com 10 μL, juntamente com uma certa quantidade de água, torna o volume total o mesmo que o volume requerido para cada preparação, como PC. A água também é usada como NC.

8 . Purificar o RNA da amostra com o método escolhido. Este kit é compatível com a maioria dos kits de extração de RNA viral no mercado- É.

trêsReação ProbeqRT-PCR(Sistema de 20 μL, realizado na sala de preparação de amostras)

9 . Se for feita uma análise quantitativa e apenas uma repetição, marcar N + 9 tubos de PCR, dos quais N + 2 para N + 2 amostras obtidas anteriormente, 1 para controle negativo de PCR (com água como modelo) e 6 para curvas padrão. Se a análise qualitativa for feita e apenas uma repetição for feita, marcar N + 4 tubos de PCR, dos quais N + 2 para N + 2 amostras obtidas anteriormente, 1 para controle negativo de PCR (com água como modelo) e 1 para controle positivo de PCR (com diluição de controle positivo no tubo 4 como modelo). A seguir, apenas a análise quantitativa descreve as etapas operacionais.

10 . Pressione a tabela abaixo para adicionar os componentes no tubo de marcação (esta tabela lista apenas uma repetição. O controle positivo é definido após a configuração do tubo de amostra e do controle negativo, e as amostras de controle positivo devem ser adicionadas até que todas as tampas do tubo estejam armazenadas)

11.Depois de cobrir a tampa, siga os parâmetros abaixoqRT-PCR:

IV. Tratamento de dados

Se este kit for usado para teste quantitativo, a curva padrão será desenhada com o valor log da concentração de controle positivo como eixo horizontal e o valor Ct como eixo vertical. Depois, o valor log da concentração de RNA da amostra é calculado a partir da curva padrão para o valor Ct da amostra medida.

13 . Se esta caixa for usada para testes qualitativos e somente for considerada positiva ou negativa, a Ct do controle negativo deve ser maior ou igual a 40. O controle positivo deve ter um aumento logarístico de fluorescência, com uma curva típica de amplificação, e o valor de Ct deve ser menor ou igual a 30. As amostras tratadas são negativas se o seu Ct for maior ou igual a 40 e positivas se for menor ou igual a 35. Se estiver entre 35 e 40, repita. O valor de Ct do experimento repetido é negativo se for maior ou igual a 40 e positivo se for menor que 35.