Células originais de rato

Células originais de ratoMétodo de transmissão:

I. Transmissão digestiva das células de parede

1, absorver ou derramar o líquido antigo da garrafa.

Adicione cerca de 1 ml de líquido digestivo (mistura com EDTA) e agite suavemente a garrafa de cultura para que as células do fundo da garrafa sejam mergulhadas na solução.

Depois de 2-5 minutos de digestão, coloque a garrafa de cultura sob o microscópio para observação, descobrindo que as células da parede original tendem gradualmente a circular, quando ainda não flutuam, descarte o líquido digestivo e adicione o líquido de cultura para terminar a digestão.

4, usar uma suína para soprar as células coladas na parede em suspensão, vacinar em outras duas ou três garrafas de cultura, colocar em uma caixa de cultivo de 37 ° C para continuar a cultivar. No dia seguinte, observe o crescimento.

Transmissão de células suspensas

1 – Transmissão direta

1) Deixe as células em suspensão se precipitar lentamente no fundo da garrafa e absorva 1/2-2/3 da limpeza superior.

2) Após a formação de uma suspensão celular com uma suína, inocular em outras duas ou três garrafas de cultura e colocar em uma caixa de cultura de 37 ° C.

2. transmissão de centrifugação

1) Transferir as células juntamente com o líquido de cultura para dentro do tubo de centrifugação, centrífuga 800-1000 rpm, por 5 minutos.

2) Remover a limpeza superior, adicionar um novo líquido de cultura dentro de um tubo centrífugo, com uma aspiradora soprando para formar uma suspensão celular.

3) Vacinar a suspensão celular em outras duas ou três garrafas de cultura e colocar em uma caixa de cultura de 37 ° C.

Células originais de rato5 erros comuns no cultivo

Erro 1:Um pequeno tubo de células primordiais descongelado em um banho de água por um tempo

Correção 1As células originais são muito sensíveis ao processo de descongelamento, por isso é importante colocar o frasco em um banho de água de 37 ° C, manter e girar suavemente até que o conteúdo acabe de descongelar. Em seguida, a garrafa deve ser retirada imediatamente do banho de água e transferida para a mesa de operação estéril. Certifique-se de que sua garrafa de cultura esteja pronta antes de descongelar para que possa ser usada imediatamente para vacinar as células e colocar-se em uma caixa de cultura.

Erro 2:Centrifugação direta das células originais após o descongelamento do frasco

Correção 2:Não recomendamos centrifugar as células após o descongelamento, porque o procedimento de centrifugação é mais perigoso do que pequenas quantidades de resíduos de DMSO. Lembre-se de substituir o meio no dia seguinte à recuperação das células originais para remover qualquer DMSO residual.

Erro 3:Permitir que as células primitivas se tornem excessivamente fusionadas

Correção 3:Quando cresce até a convergência 100, as células originais podem envelhecer. Lembre-se de que as células originais não são 100 puras, por isso é importante minimizar o crescimento das células contaminantes. Recomendamos a cultura de transmissão de células originais quando as células atingem a fusão de 90-95%.

Erro 4:Células primitivas podem ser facilmente recongeladas

Correção 4:Normalmente, não recomendamos a recongelação das células originais, porque isso pode promover o envelhecimento celular e / ou levar a alterações funcionais. As células originais são extremamente sensíveis e a recongelação pode levar à morte ou danos celulares.

Erro 5:Células primitivas podem se multiplicar infinitamente

Correção 5:Ao contrário das linhagens celulares, as células originais têm uma capacidade de expansão limitada. Recomendamos que as células originais sejam usadas o mais cedo possível para fazer experimentos para evitar a deriva genética. Além disso, se você estiver usando um tipo de célula difícil de agregar valor, você deve monitorar de perto a morfologia celular, porque uma pequena quantidade de células misturadas (como fibroblastos) pode crescer em grandes quantidades ao longo do tempo para se tornar a célula principal.