Experimento de transmissão lenta de vírus

NegociávelAtualização em03/04

Modelo

Natureza do fabricante: Produtores

Categoria do produto

Local de origem

Consulta Online

Visão geral

O experimento de transfeção lentiviral é uma técnica que usa um veículo lentiviral modificado para importar genes estrangeiros de forma estável para as células hospedeiras. Os vírus lentos são retrovírus e têm a capacidade de infectar células divididas e não divididas, integrando genes de destino no genoma do hospedeiro para obter uma expressão estável a longo prazo. Esta técnica é amplamente utilizada em áreas como a pesquisa da função genética, a terapia genética e a preparação de células-tronco pluripotentes induzidas (células iPS).

Detalhes do produto

Um,Experimento de transmissão lenta de vírusDefinições técnicas e valores fundamentais

Transinfecção lenta do vírusÉ o uso de um veículo viral lento modificado para entregar genes estrangeiros para as células alvo, realizandoExpressão estável a longo prazoTecnologia de importação genética. As principais vantagens incluem:

Aplicabilidade celular de amplo espectroPode infectar células divisórias e células não divisórias (por exemplo, neurônios, células tronco, células progenitoras), ultrapassando os limites tradicionais de transfecção.
Expressão integrada eficienteO RNA viral é transcrito em DNA e integrado no genoma hospedeiro, alcançando a expressão persistente de genes exóticos.
Baixa imunogenicidadeEliminar os genes causantes do vírus (como o HIV)TaterevReduz significativamente a resposta imunológica do hospedeiro.
Facilidade de operaçãoNão é necessário um reagente de transfecção complexo para infectar as células diretamente através de partículas virales.

Definição de Termos：

Transfecção (Transfection)Geralmente se refere à importação de ácidos nucleicos não mediada por vírus (por exemplo, eletroporação, liposomas).

Transdução (Transduction)Refere-se especificamente à transmissão genética mediada por vírus, a tecnologia de vírus lento pertence a essa categoria.

Dois.Experimento de transmissão lenta de vírusMecanismos moleculares: da embalagem viral à integração genética

Composição do sistema de portadores de vírus lentos

Componentes	Funções	Evolução tecnológica
Transferência de plasmidos	Transporte de genes estrangeiros (como cDNA, shRNA) e sinais de embalagem (Ψ)	Remoção de veículos de terceira geraçãoTatEm vez disso, use o CMV Launcher Sub-Driver Transcrição
Plasmas de embalagem	Proteínas estruturais do vírus (Gag, Pol)	Divisão em plasmidos gag/pol e rev para reduzir o risco de recombinação
Proteínomas de revestimento	Expressa a proteína VSV-G (proteína G do vírus da bucite vesicular), determinando o intervalo do hospedeiro	Alternativa ao envelope natural do HIV para expandir o tipo de células infectadas
Plasmidos auxiliares	Fornece proteína Rev para promover a nucleação de RNA não cortado	Aumentar a produção de vírus

Processo de entrega de genes dentro da célula hospedeira

O vírus entraA proteína VSV-G liga-se ao receptor da membrana celular alvo (como LDLR), mediando a fusão da membrana.
Reversão e NuclearizaçãoO RNA viral é reversamente transcrito como cDNA na citoplasma e transportado para o núcleo através do complexo pré-integrado (PIC).
Integração do genomaA integrase viral insere aleatoriamente o cDNA no cromossomo hospedeiro para obter a expressão persistente de yong.

Processo operacional padrão e otimização técnica

Embalagem e purificação do vírus (por exemplo, células 293T)

Passos	Pontos de operação	Padrões de Controle de Qualidade
Transfexão plasmática	Sistema tetraplasmídico (transferência + embalagem + envelope + auxiliar) transfectação de células 293T, 48-72 horas de coleta de HDL	Pureza plasmática > 1,8 (A260/A280), sem endotoxinas
Concentração de vírus	Supercentrifugação (50.000 x g) ou método de precipitação PEG para aumentar a titração de 10 a 100 vezes	Titre após concentração > 1 x 108 IFU/mL
Determinação da titração	Citometria de fluxo (gene de relatório de fluorescência) ou qPCR (número de cópias do genoma viral)	Título funcional (TU/mL) > 107 é qualificado

Transfeção e triagem de células alvo

Otimização das condições de infecção：

A adição de poliamina (Polybrene, 8 μg / mL) aumenta a adsorção do vírus.
Teste de infecção múltipla (MOI): geralmente MOI = 5-20 (ajustado de acordo com o tipo de célula).

Triagem de cepas estáveis：

Triagem antibiótica: Purimicina (1 μg / mL) durante 7-14 dias para limpar as células não transfectadas.
Ampliação monoclonal: diluição limitada para obter cepas celulares uniformes.

Habilidades-chave：

As células não divididas, como os neurônios, devem prolongar o tempo de infecção até 72 horas.

As células progenitoras recomendam o uso de um baixo MOI (≤5) para evitar a toxicidade.

Produto semelhante Recomendar